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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

腦血管是由內(nèi)膜、中層彈力層和外膜構(gòu)成，三層緊密貼合在一起。其中，外膜是專門的支持組織，由結(jié)締組織組成，主要成分是成纖維細(xì)胞，其在血管炎癥反應(yīng)、血管重塑等方面發(fā)揮重要作用。

細(xì)胞特性：

1）組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腦組織。

2）細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽(yáng)性。

3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf 原代 成纖維 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

12S-type(Alox12/Alox12p)ELISAkit

猴可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)elisa分析檢測(cè)試劑盒

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動(dòng)物組織鈉/鉀ATP酶（Na＋/K＋ －ATPase）活性比色法

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白細(xì)胞介素36γ抗體

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紅細(xì)胞腺苷脫氨酶3抗體

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細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化物（MDA）活性TBARS比色法定量檢測(cè)試劑盒

總脂酶脂蛋白脂酶LPL/ 肝脂酶HL 測(cè)試盒 100管/48樣 50管/24樣 比色法

石蠟切片神經(jīng)纖維熒光染色（PGP9.5）試劑盒

小鼠促紅細(xì)胞生成素(EPO)elisa檢測(cè)試劑盒

PPRC1蛋白抗體

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CD2結(jié)合蛋白3抗體

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神經(jīng)細(xì)胞胞漿蛋白9.5抗體（蛋白基因產(chǎn)物9.5）  Anti-UCHL1/PGP9.5

凋亡相關(guān)蛋白10抗體  Anti-PDCD10

神經(jīng)母細(xì)胞瘤蛋白PHOX2B抗體  Anti-PHOX2B

磷酸化神經(jīng)突觸前膜胞內(nèi)蛋白抗體  Anti-phospho-STXBP1(Ser515)

PE-Cy3標(biāo)記的羊抗牛IgG H&L

原基因18家族STMN3蛋白抗體  Anti-STMN3

Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgM

Rabbit Anti-Chicken IgM / Cy5.5

小鼠腦血管成纖維細(xì)胞磷酸化Ras相關(guān)GTP結(jié)合蛋白抗體